O enredo decorre de uma história fictícia dentro de eventos reais e segue a batalha ancestral entre os Assassinos, que lutam pela liberdade, e os Templários, que desejam controlar a humanidade. A trama se desenrola no século XXI onde Desmond Miles, o protagonista da série, com a ajuda de uma máquina conhecida como Animus, revive as memórias dos seus ancestrais para o ajudar a descobrir uma maneira de prevenir o Apocalipse de 2012.
A história principal se desenrola antes, durante e depois da Revolução Americana entre 1765 e 1783 e segue o ancestral de Desmond, de ascendência mohawk e inglesa, também conhecido como Connor, enquanto ele luta contra as tentativas dos Templários de controlar a nova nação.
O jogo se foca principalmente no uso das técnicas de combate e de infiltração para eliminar alvos e explorar o ambiente. Como Connor, o jogador pode explorar livremente o ambiente do século XVIII de Boston, Nova Iorque e da América selvagem, bem como completar missões secundárias sem ligação à história principal. O jogo também tem uma componente multijogador, o que permite aos jogadores competirem online, sozinhos ou em objectivos de equipes. Utiliza um novo motor de jogo, o Anvil Next; construído de raiz, foi dito na altura que utiliza toda a capacidade dos sistemas e que conseguia dar "uma experiência Assassin's Creed da próxima geração".
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